Immunohistochemical evaluation of MMP-2, MMP-9 and CD31/microvascular density in squamous cell carcinomas of the floor of the mouth

The aim of this study was to evaluate the immunoexpression of MMP-2, MMP-9 and CD31/microvascular density in squamous cell carcinomas of the floor of the mouth and to correlate the results with demographic, survival, clinical (TNM staging) and histopathological variables (tumor grade, perineural invasion, embolization and bone invasion). Data from medical records and diagnoses of 41 patients were reviewed. Histological sections were subjected to immunostaining using primary antibodies for human MMP-2, MMP-9 and CD31 and streptavidin-biotin-immunoperoxidase system. Histomorphometric analyses quantified positivity for MMPs (20 fields per slide, 100 points grade, ×200) and for CD31 (microvessels <50 µm in the area of the highest vascularization, 5 fields per slide, 100 points grade, ×400). Statistical design was composed by non-parametric Mann-Whitney U test (investigating the association between numerical variables and immunostainings), chi-square frequency test (in contingency tables), Fisher's exact test (when at least one expected frequency was less than 5 in 2×2 tables), Kaplan-Meier method (estimated probabilities of overall survival) and Iogrank test (comparison of survival curves), all with a significance level of 5%. There was a statistically significant correlation between immunostaining for MMP-2 and lymph node metastasis. Factors associated negatively with survival were N stage, histopathological grade, perineural invasion and immunostaining for MMP-9. There was no significant association between immunoexpression of CD31 and the other variables. The intensity of immunostaining for MMP-2 can be indicative of metastasis in lymph nodes and for MMP-9 of a lower probability of survival.

O objetivo deste estudo foi avaliar a imunoexpressão de MMP-2, MMP-9 e CD31/densidade microvascular em carcinomas espinocelulares de soalho bucal e correlacionar os resultados com variáveis demográficas, de sobrevida, clínicas (estadiamento TNM) e histopatológicas (grau de diferenciação tumoral, invasão perineural, embolização e invasão óssea). Dados de prontuários e de diagnósticos de 41 pacientes foram revisados. Cortes histológicos foram submetidos à imunomarcação usando anticorpos primários para MMP-2, MMP-9 e CD31 humanos e sistema streptoavidina-biotina-imunoperoxidase. Análise histomorfométrica quantificou a positividade para MMPs (20 campos, grade de 100 pontos por lâmina, ×200) e para CD31 (microvasos <50 µm na área de maior vascularização, 5 campos, grade de 100 pontos por lâmina, ×400). O planejamento estatístico foi composto pelo teste não paramétrico U de Mann-Whitney (verificação da associação entre variáveis numéricas e imunomarcações), teste de frequências do qui-quadrado (em tabelas de contingência), teste exato de Fisher (quando pelo menos uma frequência esperada foi menor do que 5 em tabelas 2×2), método de Kaplan-Meier (estimativa de probabilidades de sobrevida global) e teste de Iogrank (comparação das curvas de sobrevida), todos com nível de significância de 5%. Houve correlação estatisticamente significante entre imunomarcação para MMP-2 e metástase em linfonodo. Os fatores relacionados negativamente com a sobrevida foram estadiamento N, gradação histopatológica, invasão perineural e imunomarcação de MMP-9. Não houve associação significativa entre imunoexpressão de CD31 e as demais variáveis. A intensidade de imunomarcação para MMP-2 pode ser indicativa de metástase em linfonodo e para MMP-9 de uma menor probabilidade de sobrevida.

Análise histológica de uma membrana colágena de submucosa intestinal suína / Histological analysis of a collagen membrane from porcine intestinal submucosa

O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta tecidual de uma membrana liofilizada a base de colágeno I derivado de submucosa intestinal suína. O material foi implantado no tecido subcutâneo do dorso de 15 camundongos e os componentes celulares da resposta inflamatória e a degradação da membrana foram analisados em cortes histológicos corados por hematoxilina-eosina após uma, três e nove semanas (ISO 10993-6). Após uma semana de implantação, havia tecido de granulação justaposta à membrana colágena, com muitos vasos sanguíneos de pequeno calibre, predomínio de infiltrado celular mononuclear e fibroblastos e início de hidrólise do material. Em três semanas da implantação, células gigantes multinucleadas de corpo estranho adjacentes aos limites do material implantado estavam presentes, o tecido conjuntivo era frouxo e observou-se pequena degradação do material. A membrana estava presente após nove semanas e apresentava moderado grau de hidrólise, porém conservava sua estrutura funcional; havia fraca presença de neovascularização e persistência de células gigantes multinucleadas de corpo estranho. Com base nos resultados obtidos pode-se concluir que a membrana testada é biocompatível, bioabsorvível e sugere potencial de aplicabilidade clínica em seres humanos.

The aim of this study was to evaluate the biocompatibility and biodegradability of a freeze-dried membrane based on type I collagen derived from porcine intestinal submucosa. The membrane was implanted in the dorsal subcutaneous tissue of 15 mice and the cellular components of the inflammatory infiltrate and the degradation of the membrane were analyzed in histological sections stained with hematoxylin-eosin after one, three, and nine weeks (ISO 10993-6). One week after implantation, there was a granulation tissue juxtaposed to the membrane, with many blood vessels of small diameter, and predominance of infiltrated mononuclear cells and fibroblasts; membrane hydrolysis initiate at this point. Three weeks after implantat ion, foreign body multinucleated giant cells adjacent to the limits of the implanted membrane, a loose connective tissue, and little degradation of membrane were also observed. The membrane was present nine weeks after implantation and showed moderate hydrolysis; however, its functional structure remained unaltered; there was discret presence of blood vessels and foreign body multinucleated giant cells remnants. The authors concluded that the membrane derived from porcine intestinal submucosa is biocompatible and bioabsorbable, suggesting its potential clinical applicability in humans.